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球场兴奋剂【莱克多巴胺】的高效液相HPLC检测方案

2018年俄罗斯世界杯已尘埃落定,法国队时隔20年后再次捧起了大力神杯。本次俄罗斯世界杯赛场精彩纷呈,让全世界的球迷们大饱眼福。

可能大家都没在意,每一场球赛的顺利进行,都离不开检测人员的努力。参加本届世界杯的736名球员,都至少接受过一次药检,总共超过2700次药检,所有样本结果都正常,没有出现阳性结果。

比赛场上备受关注的兴奋剂,您对它了解有多少呢?它是如何被准确无误地被检测出来的?


【莱克多巴胺】


莱克多巴胺是兴奋剂的一种,兴奋剂在英语中称“Dope”,是国际社会对禁用药物的一个习惯性统称,兴奋剂并不都具有兴奋性(如利尿剂),甚至有的还具有抑制性(如β-阻断剂)。国际奥委会已经规定的属于兴奋剂的部分药品有:氯三苯乙烯、硝酸甘油、皮质类固醇、蛋白合成类固醇、诺龙、促红细胞生成素、睾丸素、支气管扩张剂、蛋白合成激素、苯乙酸诺龙等。使用兴奋剂,将对人的生理、心理产生极大的危害,使服用者心力衰竭、激动狂躁,成年女性男性化,男子过早秃顶,前列腺炎,前列腺肥大,患糖尿病,心脏病等,严重损害人的身心健康。


曾经,西马特罗、特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、多巴胺6种β-兴奋剂,一度被广泛应用于动物养殖中,现在新的规定则禁止所有的β-兴奋剂药物在动物养殖中使用。目前,在肉类市场上,商品猪生产者为了高效率地生产出瘦肉率高、质量好的猪肉来跟其他的动物产品竞争,兴奋剂的使用仍有存在。采用液相色谱法检测动物组织中莱克多巴胺的含量,不仅成本低,而且操作简便、精密度高、检出限低、回收率高、重现性较好。


【样品的制备】


取试样5~10g至50mL聚丙烯离心管中,加入4g 无水硫酸钠(600 ℃烘2h)和10mL 乙酸乙酯-正丁醇混合液涡动提取15s ,超声提取10min,2500r/min离心5min ,用10mL乙酸乙酯-正丁醇混合液重复提取1次,合并乙酸乙酯-正丁醇层于50mL鸡心瓶中,加入异丙醇 5mL,在(70±5)℃下旋转蒸干。用0。04moL/L盐酸溶液3mL分3次溶解鸡心瓶中的残渣,转移至10mL离心管中(上层沉淀可用脱脂棉过滤除去),30000r/ min离心5min,取上清液过SLS小柱(依次用5mL水、5mL 甲醇、5mL 0。04moL/L 盐酸溶液预处理),保持流速为1mL/ min, 然后依次用5mL水、5mL甲醇淋洗小柱,真空抽干,用10mL4 %氨/甲醇溶液洗脱 ,收集洗脱液,在(50±5)℃下用氮气流吹干。用2%乙酸溶液定容到1mL,过0。45μm 微孔滤膜,供液相测定。


【标准曲线的绘制】


精密称取莱克多巴胺对照品25mg ,置100mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为莱克多巴胺储备液。精密量取莱克多巴胺储备液200uL,置10mL 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,得莱克多巴胺工作液。分别准确吸取一定量的标准工作液,用流动相溶液稀释,定容,配制成浓度分别为2.5、5、10、15、25ng/ mL 的标准溶液,分别进行HPLC检测。


【色谱条件】


检测器:荧光检测。 激发波长:226nm,发射波长:305nm,

色谱柱:C18 色谱柱(4. 6m ×250 mm ,5μm)

流动相:流动相为戊烷磺酸钠溶液[取800mL水,加20mL冰醋酸和0.87g戊烷磺酸钠(C5H11O3SNa·H2O)混匀]∶乙腈(78∶22,V/V)

流速:1。 0mL/ min

进样量:20μL

柱温:30℃


【谱图】


图谱.jpg


药品检测仪器配置】


图.jpg


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