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鱼粉中氨基酸的高效液相色谱(hplc)检测方案

随着我国饲料工业的发展,鱼粉的需要量逐年增加,鱼粉的质量问题越来越引起饲料行业、养殖业的重视。鱼粉是水产饲料的主要蛋白源,尤其含有动物生长所必需的氨基酸,由于鱼粉用量大,价格高,有些厂家掺杂使假、以次充好,使鱼粉质量参差不齐,这一行为业给鱼粉品质分析带来了一定困难。因此,有必要建立一个有效的手段对鱼粉中氨基酸进行定量分析。


鱼粉图片


以下是赛智科技利用LC-10Tvp高效液相色谱仪对鱼粉进行的HPLC检测方案。

     (本应用方案请勿转载,侵权必究)


1、仪器与试剂

    1.1仪器、设备

    LC-10Tvp高效液相色谱仪

    Vertex 色谱柱AA:250mm×4.6mm×5μm

    分析天平

    恒温箱,温度控制在110±1℃

    微量进样器,(20μL)一支

    漩涡混匀器

    氮吹仪

    针头过滤器

    微孔滤膜:0。45µm

    1.2试剂

    盐酸溶液,6mol/L:将优级纯盐酸与水按1:1(V/V)混合。

    氨基酸标准工作溶液。

    乙腈,色谱纯。

    三水合醋酸钠,优级纯。

    冰醋酸。

    正己烷,色谱纯。


2、供试品溶液和对照品溶液的制备

对照品溶液的制备   取氨基酸混合工作标液500ul,用水稀释至5ml,即得。

供试品溶液的制备   称取试样50-100mg(准确至0。1mg)于据塞试管中,加入6。0mol/l盐酸10ml,混匀,充分提取10min,盖紧盖子。将样品置于110℃恒温干燥箱中,水解22-24h。冷却后充分混匀,过滤。根据实验要求移取适量上清液,60℃下氮气吹干,备用。以下按照衍生方法包进行。


方法包衍生方法:将恒温水浴锅预热至50±1℃,分别将A、B两种衍生试剂用稀释至原来浓度的1/5倍。精密量取上述对照品1ml,至于试管中,加入稀释后的A溶液0.5ml和稀释后的B溶液0.5ml,摇匀;在50±1℃的水浴中加热45分钟,取出,加入正己烷溶液1ml,振摇;并用孔径为0.45μm有机膜过滤,放置30min后,取澄清的下层液进行分析实验。供试品的衍生步骤与对照品相同。


3、色谱条件

   色谱柱:AA  4. 6 mmx250 mm,粒度5 µm


    流动相:

    流动相A:0.1mol/L醋酸钠溶液(pH6.5):乙腈=93:7

    配置方法:准确称取三水合醋酸钠13。6g于1000ml水中,搅拌均匀,溶解,用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6。5; 准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml和乙腈35ml,混合均与,抽滤,过0。45μm滤膜。

    流动相B:水:乙腈=20:80。


    配制方法:准确量取水100ml和乙腈400ml,混合均匀,抽滤,过0.45μm滤膜。

    波长:254nm

    流速:1. 0 mL/min


   梯度设置:


4、测定法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪,测定,即得


5、谱图  


11.jpg




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